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纳豆激酶是怎么提取的?
作者:admin 来源:未知 点击: 发布日期: 2021-07-29 11:27
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纳豆激酶是怎么提取的? 首先纳豆激酶是胞外酶,纳豆激酶提取工艺可利用纳豆菌的发酵液提取,省去了细胞破碎和缓冲液抽提的步骤。具体方法如下: (1)将购买或从纳豆中分离筛选得...
纳豆激酶是怎么提取的?
首先纳豆激酶是胞外酶,纳豆激酶提取工艺可利用纳豆菌的发酵液提取,省去了细胞破碎和缓冲液抽提的步骤。具体方法如下:
 
(1)将购买或从纳豆中分离筛选得到的菌株接种到液体培养基中,37C恒温培养,4000 rpm离心30min,取上清液,即为粗酶液。
 
(2)用硫酸铵分级沉淀的方法除去杂蛋白、多糖等。取上清液缓慢加入硫酸铵至25%饱和度,低温过夜,4000 rpm离心30 min去除杂蛋白,再取上清液,在上清液中再加入硫酸铵至终饱和度为60%,低温过夜,4 000 rpm离心30 min除去多糖类物质,收集沉淀,溶于缓冲液中,得到的为粗酶液。
 
 
(3)粗酶液经透析脱盐,除去硫酸铵。
 
(4)纳豆激酶是怎么提取的?学者们为了最终获得符合要求的产物,将样品进行多级层析,目的是先层析浓缩样品和去除杂质,再层析去除残存杂质、目的蛋白的多聚物或降解片段。凝胶层析和离子交换层析可提出较高纯度的酶,但是应注意层析介质的选择。将发酵液经硫酸铵沉淀后通过Superdex 75凝胶层析和SPSepharose Fast Flow离子交换层析[8],发现经硫酸铵沉淀后得到的粗酶中杂蛋白不多,凝胶过滤可分离一部分杂蛋白,再经离子交换层析后,电泳可得到单一条带的纳豆蛋白产品,Mr为27700. :以_上每一步都要进行酶的活性测定。测定方法为:纤维蛋白块溶解时间( CLT)法。大家比较关心的>>纳豆菌与纳豆激酶的区别 ?咱们前面已经做了详细阐述,点击查看。
 
    纳豆激酶是怎么提取的?参照t2PA、 尿激酶等溶栓物质活性测定方法加以改进而建立的。具体方法: 0 C下,在小试管中依次加入凝血酶、巴比妥钠缓冲溶液、纳豆激酶样品溶液和纤维蛋白原,强烈搅拌,置于37 C恒温水浴中。从纤维蛋白形成起开始计时,随着反应液混浊,有气泡上升到液面,至气泡不再冒出时所用的时间作为纤维蛋白溶解的时间。同样以标准纳豆激酶或尿激酶、纤溶酶等作为标准品绘制标准曲线。以CLT对纳豆激酶浓度的对数作图,在10人70μg 范围内有很好的线性关系。
 
纳豆激酶可以溶解血栓吗?纳豆激酶具有直接和问接地溶解血栓的作用,Yatagai等[3]研究还发现经高温失活的纳豆激酶仍能刺激活细胞产生t-PA。纳豆激酶主要有四种溶栓途径:①尿激酶途径,纳豆激酶激活尿激酶原使之成为尿激酶,尿激酶再激活纤溶酶原成为纤溶酶,纤溶酶水解纤维蛋白从而发挥溶血栓的作用;②t-PA途径,纳豆激酶促进血管内皮细胞分泌t-PA,刺激纤溶酶原转化为纤溶酶241;:③纤溶酶原激活剂1型抑制剂(PAI-1)途径:通过降解和失活纤溶酶原激活剂1型抑制剂,促进尿激酶和t-PA的产生,发:挥t-PA途径25];④直接溶栓途径:纳豆激酶直接分解快速地将纤维蛋白水解成氨基酸和小肽而溶解血栓,前三种都是纳豆激酶间接地发挥作用,后一种是直接发挥溶栓作用,四种作用机理 。  纳豆激酶是怎么提取的? 上面咱们做了临床数理分析,可以认真阅读。

 

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